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甘油檢測試劑盒液體,組織樣本都可以檢測
更新時間:2021-01-04   點擊次數(shù):698次

甘油檢測試劑盒液體,組織樣本都可以檢測

 

 

描述:甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯;激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣,甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標,但檢測更方便。本試劑盒采用甘油氧化酶法和經(jīng)典GPO-Trinder酶學反應相結合的方法,通過比色法測定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu)化后,操作步驟更加簡單,可靠性和重復性俱佳,適合生物醫(yī)學、食品實驗室檢測。

 

 

 

原理:ATP存在下甘油被甘油激酶化為3-甘油,再被甘油氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫;在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比。

 

適用范圍:測定血液、細胞培養(yǎng)基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。

 

組成   

R1試劑 40 ml

R2試劑 10 ml     

4 mmol/L甘油標準品1 ml

4 ºC,儲存3個月。

 

一所需設備:酶標儀、生化分析儀或721722型可見光分光光度計。工作波長550nm,如無此波長建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。

 

 

 

 工作溶液配制:4:1比例,取4 ml試劑R11 ml試劑R2混合,立即使用或4ºC保存<1天,變色棄去。

 

 標準品稀釋:用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體,將4 mM甘油標準品倍比稀釋為1000、500、250、12562.5、31.25、15.6257.8125 µmol/L,通常取其中4~6管即可,注意設置0濃度對照反應管

 

 甘油濃度測定:

參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致,減小實驗誤差,可先加入標準品、待測樣品,然后再加入工作溶液。(注意:當甘油濃度較低時,可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合,然后再進行測定,但是如果樣品體積超過100µl時將會稀釋工作液中酶的濃度,使反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍,可進行適當稀釋,然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計算樣品中甘油濃度。)

37ºC25ºC反應 10分鐘。反應平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零,然后測定各管OD值。

繪制標準曲線并計算甘油濃度。

Excel作圖步驟:各標準管OD值為y軸,標準品濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù),點擊做圖向?qū)?,選擇-散點圖-,點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點,點擊-添加趨勢線-,點擊-選項-,點擊-顯示公式--R2-

 

 

說明:

1、維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。

2正常血清甘油濃度為20-130µmol/L,細胞培養(yǎng)時須用不含酚紅的無色無血清培養(yǎng)基,如果培養(yǎng)基中含有酚紅,可以選擇含有酚紅的無細胞培養(yǎng)基作為對照進行測定

 

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