超微量 Na +K+–ATP 酶測試盒的樣本前處理-南京信帆生物技術有限公司

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更新時間：2023-12-01 點擊次數(shù)：235次

超微量 Na +K+–ATP 酶測試盒的樣本前處理
（貨號：A070-2測組織、培養(yǎng)細胞）

二、樣本的前處理：
1、組織的前處理：（組織勻漿上清液的制備參考實驗方法學）
準確稱取組織重量，按重量（g）：體積(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液（即 10%的勻
漿上清液），再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%，同時用考馬斯亮藍試劑測定組織蛋白（試劑本所有售）。如果預試結(jié)果太高，再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度再進行預試后再決定取樣濃度。
2、培養(yǎng)細胞的前處理：將培養(yǎng)細胞消化，離心，棄上清，留下層細胞，每管加 0.2～0.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備成 10 7 /cm3 細胞懸液，即 10 7 /mL，再進行破碎。破碎細胞的方法有三種：①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。③、反復凍溶 3 次（第③種方法有時會影響酶活力）。制備好的細胞懸液不需要離心，同時用考馬斯亮蘭試劑測定組織蛋白（試劑本所有售）。再將細胞勻漿液稀釋成不同濃度進行預試，根據(jù)預試結(jié)果決定取樣濃度。
[注 1]：在測試加樣前要搖勻后取樣。
[注 2]：不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻漿或稀釋樣本。
[注 3]：預試結(jié)果將絕對吸光度值（A 測定—A 對照）控制在 0.2 左右為宜。

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