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紅細(xì)胞裂解液-關(guān)于樣本的處理

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是利用細(xì)胞內(nèi)外存在鹽離子濃度差而導(dǎo)致細(xì)胞膜脹破的原理來(lái)裂解無(wú)核紅細(xì)胞的。本產(chǎn)品經(jīng)無(wú)菌處理，主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化，淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞的去除。

紅細(xì)胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer,或稱(chēng) ACK Lysis Buffer）是一種去除紅細(xì)胞簡(jiǎn)便易行的方法，即用裂解液裂解紅細(xì)胞，它既不損傷有核細(xì)胞又能充分的去除紅細(xì)胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細(xì)胞去除方法，主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細(xì)胞的分離純化，淋巴細(xì)胞的分離純化以及組織細(xì)胞蛋白與核酸提取等實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞的去除。經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解得到的組織細(xì)胞中不含紅細(xì)胞，可進(jìn)一步用于原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、流式細(xì)胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。

使用說(shuō)明：

1. 1倍體積的新鮮全血，加入3倍體積的紅細(xì)胞裂解液。如1ml新鮮全血加入3ml紅細(xì)胞裂解液，輕輕渦旋或顛倒混勻。

2. 冰上放置15分鐘，其間輕輕渦旋混勻兩次，紅細(xì)胞裂解后，溶液應(yīng)該是清亮透明的。

3. 收集細(xì)胞：4℃，450×g離心10分鐘以沉淀白細(xì)胞，小心吸棄上清液。

4. 向白細(xì)胞沉淀中加入兩倍體積的紅細(xì)胞裂解液，輕輕渦旋充分重懸白細(xì)胞。如起始血液為1ml，則加入2ml的紅細(xì)胞裂解液。

5. 4℃，450×g離心10分鐘沉淀白細(xì)胞，小心并*吸去上清液。    6. 重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如提取RNA，于此步開(kāi)始使用DEPC水配制的溶液進(jìn)行操作。  （組織細(xì)胞處理：新鮮組織經(jīng)胰-酶或膠原酶等消化分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，離心棄去上清液，其余同上。）

組織細(xì)胞樣品：

1.新鮮組織經(jīng)胰-酶或膠原酶等消化分散成單個(gè)細(xì)胞懸液，離心棄去上清液；

2.從4℃冰箱中取出ELS裂解液，按1:3-5的比例向細(xì)胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml細(xì)胞壓積加入3-5ml裂解液），輕輕吹打混勻；

3.800-1000rpm離心5-8分鐘，離心棄去上層紅色清液；

4.收集沉淀部分，加入Hank’s液或無(wú)血清培養(yǎng)液離心洗2-3次；

5.如裂解不完-全可重復(fù)步驟2和3；

6.重懸細(xì)胞，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如提取RNA，最好是于步驟4開(kāi)始使用DEPC水配制的溶液中進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：

本裂解液為無(wú)菌產(chǎn)品，分離細(xì)胞用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)請(qǐng)注意無(wú)菌操作。

為了您的安全與健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。